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2021年9月15日内容提供人:Euroimun AG

SARS-COV-2的免疫应答综合分析


分析SARS-CoV-2特异性体液和细胞免疫反应是评估COVID-19疫苗疗效的关键。

最目前使用的疫苗基于SARS-COV-2穗蛋白质。尖峰蛋白的S1亚基的受体结合结构域(RBD)负责与人细胞受体血管紧张素转换酶2(ACE2)结合,并将病毒的进入介导进入宿主细胞。IgG类抗体对S1 / RBD和特定的长寿命的T细胞似乎在病毒中和和持续免疫中起最重要的作用。

EuroimMun提供强大的CE标记的测试系统,用于定量测量抗S1 / RBD IgG抗体,测定这些抗体的中和效果,以及SARS-COV-2-反应性T细胞的分析:

  • 抗SARS-CoV-2定量酶联免疫吸附试验(IgG):Ce标记的ELISA,用于定量标准化单位(BAU / ML)中的抗S1 / RBD IgG浓度
  • SARS-CoV-2 NeutraLISA:Ce标记的替代病毒中和试验中的ELISA格式,用于检测靶向S1 / RBD的中和抗体
  • QUAN-T细胞SARS-COV-2 / QUAN-T-Cell ELISA:用于定量检测sars - cov -2特异性t细胞释放IFN-γ的ce标记干扰素释放试验(IGRA)

这种全面分析支持在感染或用穗蛋白质的疫苗接种后对免疫应答的评估。

定量抗体检测
对S1 / RBD的抗体的定量测定有助于评估在感染后对SARS-COV-2的个体免疫应答的评估和测量疫苗接种后的免疫反应。

Anti-SARS-CoV-2 QuantiVac ELISA (IgG)是一种ce标记的全自动检测方法,可根据国际参考材料(NIBSC代码:20/136)使用六点校准曲线,以标准化结合抗体单位(BAU/ml)定量抗s1 /RBD IgG抗体浓度。

该检测方法与国际标准具有良好的相关性(图1)。抗sars - cov -2 QuantiVac ELISA (IgG)与不同中和试验的结果也非常一致。

该试验验证了血清、血浆和干毛细管血作为样本材料。在一项首次使用Anti-SARS-CoV-2 QuantiVac ELISA (IgG)的研究中,57人在使用Moderna、辉瑞/生物技术公司(Pfizer/BioNTech)或阿斯利康(AstraZeneca)的疫苗首次和第二次免疫后的三周时间内分析了免疫应答。

结果表明,疫苗接种后的时间间隔越长,抗体浓度越高。此外,根据所用疫苗测定不同的抗体浓度。第二次疫苗接种后采样的所有样品显示出非常高的抗体浓度。

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图1所示。抗sars - cov -2定量ELISA (IgG)与世界卫生组织国际标准的相关性研究

中和抗体的测定
通过测量抗S1/RBD抗体的中和活性,可以确认其抑制S1/RBD与ACE2结合并防止宿主细胞感染的功能。

ce标记的SARS-CoV-2 NeutraLISA是一种ELISA格式的替代病毒中和试验(sVNT),用于检测抗SARS-CoV-2抗体的抑制效果。

该测试程序是基于患者样本中和抗体和生物素化的ACE2受体之间的竞争性结合,以重组S1涂在微孔板上。样品中中和抗体浓度越高,颜色反应越弱。

该分析提供了一种快速和经济的替代金标准PRNT,这是昂贵和耗时的执行。与PRNT相比,SARS-CoV-2中和抗体不要求使用生物安全三级(BSL-3)实验室条件。

只需2小时即可执行,并且是自动的,这使其适用于常规诊断,包括高吞吐量。该测试表明,与PRNT的定性结果协议98.6%(表1)。

在上述研究中,使用SARS-CoV-2 NeutraLISA对57个样本进行了额外分析。结果证实,在接种疫苗的研究参与者的样本中检测到的抗体大部分是中和抗体。这些抗体对SARS-CoV-2感染提供了最大的保护。

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表1. SARS-COV-2中立性和PRNT的结果比较50

特定T细胞分析
特别是对尖刺蛋白的T细胞免疫与针对SARS-COV-2的强烈保护有关,并且在没有表现出可测量的特异性抗体浓度的患者中起着特别重要的作用。

可以使用干扰素-γ释放测定(IGRA)测定对SARS-COV-2的T细胞介导的细胞免疫应答。与Quan-T细胞SARS-COV-2组合使用的Euroimmun CE标记的Quan-T细胞ELISA能够快速,自动和定量测定SARS-COV-2特异性T细胞释放的IFN-γ。

在测试过程中,在提供的试管中使用基于刺突蛋白的抗原刺激患者样本中的T细胞,随后使用全自动定量ELISA检测释放的IFN-γ。

测定对肝素化的全血样进行,规避需要制备纯化的外周单核细胞(PBMC)。EuroimMun建议使用来自来自健康血液供体的114个样品的研究建议截止200muu / ml,这对于抗SARS-COV-2的IgG和IgA抗体负阴性。

在一项进一步的内部研究中,使用EUROIMMUN IGRA对46例抗sars - cov -2 IgG和IgA抗体检测结果一致阳性或阴性的人的样本进行了调查。阳性样本的一致性为93.8%,阴性样本的一致性为96.7%,表明在大多数被测试者中同时存在体液和细胞反应。

EUROIMMUN IGRA在研究领域已建立良好的地位,其高质量已在许多外部研究(如1,2,3,4)中得到证实。基于对143个康复和接种个体样本的研究,诊断敏感性达到97.9%。而45份来自无COVID-19感染史的未接种者的样本的诊断特异性为97.8%(数据来自参考文献1,符合EUROIMMUN的截止建议)。

IGRA也被使用,沿着抗体检测,在弱势群体(如免疫功能性的群体)(如免疫功能均衡的个体,老年人或透析患者)(1,2,4)中疫苗接种后调查免疫反应。由于风险的人可能表现出降低或不充分的免疫反应,因此免疫反应的双臂的评价至关重要,特别是在考虑潜在的助推器射击策略时。

结论
来自Euroimmun的测试三重组为SARS-COV-2进行了对体液和细胞免疫应答的全面分析,支持评估疫苗的疗效以及对Covid-19传播的流行病学研究。

进一步的信息www.coronavirus-diagnostics.com.

工具书类
1。Huzly et al。用于检测SARS-CoV-2特异性t细胞应答的新型干扰素-γ释放试验的验证和性能评估medRxiv 2021.07.17.21260316(2021)。

2。Schwarz等人。德国老年人BNT162B2疫苗接种延迟抗体和T细胞反应。Emert Infect Dis 27(8):2174-2178(2021)。

3。Hillus et al。ChAdOx1-nCoV19和BNT162b2的同源和异体启动-增强免疫的安全性、反应原性和免疫原性:一项前瞻性队列研究。《柳叶刀呼吸医学》(2021)在线出版

4.Schrezenmeier et al。慢性透析患者新冠肺炎托日美仑疫苗免疫原性研究前面。Immunol。12:690698 (2021)


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日期已发布:2021年9月15日

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